Esforços têm sido destinados ao aprofundamento do conhecimento dos biofilmes orais patogênicos, como forma de permitir o avanço na descoberta de terapias capazes de prevenir sua adesão ou promover sua erradicação, a fim de impulsionar uma melhor qualidade de vida à população. o objetivo deste trabalho foi desenvolver um modelo de biofilme multiespécie em biorreator com agitação. discos de dentes bovinos foram adaptados a um biorreator com o cemento da região cervical da raiz exposto a um meio de cultura contendo 31 espécies bacterianas, prevalentes nos casos de periodontite. após incubação em condições anaeróbias por 3 e 7 dias, os biofilmes formados na superfície do substrato foram coletados para análise. o teste de viabilidade celular, por meio da contagem de unidades formadoras de colônias (ufcs), determinou o número total de microrganismos viáveis presentes no biofilme; a análise por meio de microscopia eletrônica de varredura (mev) permitiu observar a variedade morfológica das células bacterianas e a arquitetura do biofilme; e o teste de hibridização dna-dna (eletroforese em gel de gradiente de desnaturação – dgge) identificou e quantificou as espécies bacterianas presentes no biofilme. o estudo do crescimento bacteriano, por meio da análise de massa seca e leitura de densidade óptica, também foi realizado. os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo teste u de mann-whitney (¿ = 5%) e anova one way considerarando um nível de significância de 5%. os biofilmes coletados dos segmentos radiculares após 3 dias de cultivo continham 1,1 × 109 (± 3,3 × 108) ufcs por biofilme, sem diferença significativa comparado aos biofilmes coletados após 7 dias, os quais apresentaram 9,2 × 108 (± 1,8 × 108) ufcs por biofilme (p > 0,05). nas imagens de mev foram observados biofilmes contendo células bacterianas de morfologia variada recobrindo uniformemente a superfície do cemento, tanto nos segmentos submetidos ao período experimental de 3 dias, como no de 7 dias. das 31 espécies bacterianas inicialmente inoculadas no biorreator, 29 (93,6%) estavam presentes no biofilme de 3 dias e 24 (77,4%), no de 7 dias. espécies precursoras da periodontite foram identificadas em ambos os biofilmes. a velocidade específica do crescimento bacteriano foi de 1,76 h -1. um modelo de biofilme subgengival de 3 e 7 dias de cultivo foi desenvolvido por meio do uso do biorreator com agitação, permitindo reproduzir, in vitro, comunidades microbianas complexas. este modelo pode vir a ser um método auxiliar na mimetização do biofilme clínico periodontal e permitirá o estudo de novos mecanismos de ação e compostos antibiofilme e antimicrobianos, que possam ser aplicados futuramente no combate à periodontite.