Sendo o cérebro o principal alvo de espécies ox...sendo o cérebro o principal alvo de espécies oxidantes e, consequentemente, de doenças neurodegenerativas, o estudo do efeito protetor de compostos de coordenação empregando-se células neuronais é relevante e permite comparações com os estudos realizados frente a levedura s. cerevisiae. células de levedura são comumente usadas para realizar estudos de atividade antioxidante pois são células eucarióticas e possuem várias similaridades às células humanas, como composição da membrana lipídica, atividade mitocondrial, controle do ciclo celular, mecanismos de enovelamento proteico, mecanismo de morte celular programada e propriedades de transporte veicular. assim, o estudo empregando-se esta levedura possibilita a realização de testes de atividade antioxidante de maneira reprodutível, rápida e econômica, permitindo extrapolação dos resultados para os seres humanos, já que tratam-se de células eucariontes. assim, compostos de coordenação de cu2+, fe3+ e mn2+ contendo os ligantes n,o-doadores, terão suas atividades antioxidantes avaliadas frente às células de levedura s. cerevisiae bem como células de glioma de rato (c6). as células c6 são células tumorais originárias de glioma de ratos. estas possuem uma maior taxa de metabolismo oxidativo, quando comparadas a outras células neuronais. estudos da avaliação do efeito protetor desse compostos de coordenação frente a levedura, bem como estudos anti-envelhecimento serão realizados no laboratório de estresse oxidativo, no departamento de bioquímica da ufrj, com colaboração do prof. marcos dias pereira. os estudos frente a células neuronais serão realizados no laboratório de bioenergética e estresse oxidativo (labox) – departamento de bioquímica, centro de ciências biológicas da ufsc, coordenado pela professora alexandra s. latini. o estudo da atividade antioxidante frente a levedura (investigação das atividades mimética à sod e cat) dos compostos e ligantes será realizado com a cepa de saccharomyces cerevisiae eg103 (selvagem) em glicose (ypd 2 % - 1 % de extrato de lêvedo, 2 % de peptona e 2 % de glicose) (sod) ou glicerol (ypgly 4 % - 1 % de extrato de lêvedo, 2 % de peptona, 4 % de glicerol) (cat) a proporção de 5/1 volume do frasco/volume do meio, mantidas a 28°c e 160 rpm. a concentração celular será determinada através de espectrofotômetro, fez-se medida da turbidez, de uma suspensão de células, em comprimento de onda de 570 nm. em seguida a absorvância será convertida em unidade de concentração (mg de peso seco de células/cm3) utilizando um fator de conversão que foi calculado previamente, a partir de uma curva de peso seco onde um volume adequado da suspensão de células será filtrado em filtro millipore (45 ?m) e colocado em estufa até atingir peso constante. paralelamente serão feitas diferentes diluições da suspensão de células para leitura da absorvância a 570 nm no espectrofotômetro para posterior cálculo do fator de conversão. estudos da atividade neuroprotetora dos compostos de coordenação, dos respectivos ligantes e sais metálicos serão realizados da seguinte maneira: primeiramente será feita uma curva em triplicata e escala logarítimica para determinar a concentração dos compostos a ser utilizada nos estudos de proteção antioxidantes das células c6. após este estudo inicial, será realizado o teste de citotoxicidade pelo método direto de ensaio colorimétrico à base de tetrazólio (mtt), para avaliação da viabilidade celular. a viabilidade celular é quantificada pela redução do mtt à formazan, um sal de coloração arroxeada e insolúvel em água, promovida pela enzima desidrogenase. dessa forma, a redução do mtt à formazan, será diretamente proporcional à atividade mitocondrial basal e à viabilidade celular. uma suspensão de células de glioma c6 (0,5x105 células ml-1) será preparada em meio dmem, suplementado com 10% de soro fetal bovino (sbf) e 1% de antibióticos. a placa será incubada em estufa de co2 à 37ºc por 24 h. após, serão tratadas com 100 µl das respectivas soluções controle e compostos a serem testados, nas concentrações pré determinadas. a placa será novamente incubada em estufa de co2 à 37ºc por 24 horas. serão então feitas duas lavagens com 200 µl de pbs estéril (tampão fosfato salino) à temperatura de 37ºc e então será adicionada uma solução 0,5mg ml-1 de mtt em pbs estéril. a placa será novamente incubada em estufa de co2 à 37ºc, envolta em papel alumínio, por 2 h. serão adicionados 100 µl de dmso para solubilização dos cristais de mtt. a placa será agitada em agitador por um período de 5 min, após ser retirada do agitador, ficará em repouso por mais 5 min para estabilização da cor e então será realizada a leitura por uv-vis à 540 nm. o valor obtido pela subtração da média da absorbância dos controles pela média dos brancos, será considerado como 100% de células viáveis. após constatar que os compostos não levam à morte das células c6, será realizado o estudo da atividade antioxidante dos mesmos. as células de glioma c6 serão tratadas com as concentrações pré-determinadas dos compostos e em seguida, expostas a um ambiente com estresse oxidativo induzido e submetidas novamente ao teste mtt. o estresse oxidativo pode ser estimulado de quatro formas diferentes: através da adição de rotenona, a qual inibe a produção do complexo 1 (nadh) da cadeia transportadora de elétrons (cte) impedindo a produção de atp, aumentando o estresse oxidativo e induzindo apoptose celular ; pela inibição da biossíntese de glutationa através da adição do inibidor butionina sulfoximina (bso) ; através do estimulo da formação de h2o2 (galactose + galactose oxidase); e pela inflamação induzida com interferon gamma (ifn-?) ou lipopolissacarídeo (lps). com base nos resultados obtidos empregando-se a levedura e as células c6, iremos compará-los e identificar alguma correlação entre ambos, de modo que a levedura possa ser um teste inicial, atuando como uma ferramenta mais acessível e menos laboriosa para o sreening de compostos mais ativos do ponto de vista antioxidante.