Culturas embriogênicas podem ser cultivadas por anos, mas acumulam características deletérias ao longo do tempo: crescimento reduzido; aumento da necrose; estruturas aberrantes; maturação impedida; e, eventualmente, perda completa do potencial embriogênico. esse fenômeno ocorreu em uma linha de tecido de pupunha (bactris gasipaes kunth) após oito anos de cultivo. esta tese investigou esta ocorrência através de três diferentes abordagens: (i) o uso de 5-azacitidina para reverter a hipermetilação relacionada à idade e análise da abundância de proteína em culturas de dois anos e oito anos para determinar quais processos de plantas foram os mais afetados pelo envelhecimento; (ii) otimizar a conversão de plântulas de embriões somáticos com vasos selados ou ventilados, a fim de fornecer uma fonte de plântulas para a criação de novas linhas de cultura e avaliar o efeito do ambiente de cultura sobre bioquímica celular; e (iii) prevenir o envelhecimento através do desenvolvimento de novas estratégias para otimizar a vitrificação de embriões somáticos. a 5-azacitidina estimulou o crescimento de embriões somáticos em culturas de oito anos de idade. no entanto, o crescimento de culturas embriogênicas de dois anos de idade foi interrompido. a análise proteômica mostrou que todos os tecidos foram submetidos à hipóxia, sugerindo que todos os tecidos dependiam da fermentação como meio de geração de energia. a fermentação leva à acidificação citosólica, que pode causar danos a importantes processos celulares, como o metabolismo. a análise por hplc-elsd mostrou que as culturas de dois anos tinham quantidades detectáveis de ribose, arabinose e sacarose, mas nenhum carboidrato foi detectado em culturas de oito anos de idade. além disso, muitos genes conservados relacionados ao controle epigenético foram acumulados em culturas de dois anos em comparação com culturas de oito anos de idade, sugerindo que as culturas mais jovens mantiveram uma maior quantidade de controle epigenético. no segundo capítulo, os vasos ventilados levaram a um menor crescimento de massa fresca comparado aos vasos selados de cultura, mas apresentaram maior massa seca e maior emergência de clorofila, sugerindo uma maior taxa de conversão embrionária. além disso, maior abundância do total de poliaminas, e especialmente de putrescina e menor quantidade de frutose disponíveis e glicose sugerem que as culturas em vasos ventilados foram submetidos a grandes taxas de mudança, mas suas fontes endógenas de nutrientes pode ser insuficiente para abastecer a conversão completa de um embrião para um plantlet. no terceiro capítulo, várias estratégias de otimização mostraram grande potencial paramelhorar o protocolo de vitrificação da pupunha. culturas vitrificadas descongeladas na temperatura mais quente (75 ° c) tiveram as maiores taxas de rebrotação. uma solução de vitrificação planta três diluída a 80% da sua concentração, incluindo 0,1 m de kcl, mgcl2, mgso4 ou k2h (po4) melhorou recrescimento. além disso, a desidratação parcial melhorou o recrescimento das culturas possivelmente porque foi menos traumático para o tecido em comparação com a exposição com alta concentração de solutos. os resultados desses três capítulos oferecem uma explicação do motivo pelo qual as culturas embriogênicas envelhecem e várias estratégias distintas para evitá-las.