Objetivos: o presente estudo tem como objetivo avaliar a citotoxicidade das lactamas em queratinócitos orais humanos (hok-18a) e sua atividade antibiofilme contra biofilmes mono e multi-espécie, constituídos por 14 cepas bactérias da microbiota oral. materiais e métodos: o efeito citotóxico das lactamas foi avaliado através do teste xtt [2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2htetrazolium- 5-carboxanilide] em queratinócitos orais humanos (hok-18a). para os testes de atividade anti-biofilme, as lactamas foram testadas contra 5 espécies colonizadoras iniciais, 6 patógenos orais e 3 cepas comensais. os testes em biofilme mono-espécie foram realizados através do protocolo fixação com etanol e coloração com cristal violeta. os testes multi-espécie foram realizados em um biofilme complexo multi-espécies derivado de um biorreator. tanto o crescimento planquitônico quanto a formação de biofilme foram mensurados através de q-pcr. adicionalmente, o efeito das lactamas em biofilmes multiespécie formado sobre duas superfícies diferentes também foi avaliado através de q-pcr. resultados: de 26 lactamas testadas, 24 mantiveram mais de 50% de viabilidade celular após 24h de exposição e foram selecionadas para os testes seguintes. em relação aos testes anti-biofilme mono-espécie, a maior parte das lactamas apresentou atividade de inibição do biofilme em s. oralis, s. sanguinis, a naeslundii, p. intermedia, p. gingivalis e f. nucleatum (p<0,05). ainda, 9, 3 e 1 lactamas foram capazes de diminuir a formação de biofilme em a.a., s. mutans e s. sobrinus respectivamente (p <0,05). em biofilmes multi-espécie, ainda que se verifique um leve decréscimo na formação de biofilme em s. sanguinis, a. naeslundii, s. mitis e s. gordonii, apenas em p. gingivalis e p. intermedia a inibição foi estatísticamente significativa. entretanto, quando testadas em discos de vidro, 7 espécies foram inibidas, enquanto apenas 2 em uma superfície de poliestireno. conclusão: as lactamas demonstraram ser efetivas pelos resultados obtidos tanto nos ensaios de citotoxicidade como de inibição do biofilme monoespécie, entretanto, o efeito inibitório no biofilme multi-espécies foi diminuído pela complexidade das interações bacterianas. ainda que a maioria das lactamas não tenha atividade inibitória em biofilmes multi-espécies em ambas as superfícies, devido à maior eficácia da lactama u12 em biofilmes em discos de vidro, pode-se sugerir que a superfície tem uma influência sobre o seu potencial