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Universidade Federal de Santa catarina (UFSC)
Programa de Pós-graduação em Engenharia, Gestão e Mídia do Conhecimento (PPGEGC)
Detalhes do Documento Analisado

Centro: Ciências Biológicas

Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento

Dimensão Institucional: Pós-Graduação

Dimensão ODS: Econômica

Tipo do Documento: Dissertação

Título: ENGENHARIA DE NICHO HEMATOPOIÉTICO: AVALIAÇÃO DE UM SISTEMA DE CULTURA TRIDIMENSIONAL DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DA PLACENTA HUMANA EM ARCABOUÇOS DE POLI(METACRILATO DE METILA) (PMMA)

Orientador
  • MARCIO ALVAREZ DA SILVA
Aluno
  • RODRIGO PEREZ LUCAS

Conteúdo

No contexto da engenharia de tecidos, as novas propostas têm em vista a recriação dos microambientes biológicos (nichos) onde residem as células-tronco (cts) in vivo, em particular os nichos hematopoiéticos onde as células-tronco progenitoras hematopoiéticas (ctphs) são naturalmente expandidas. sistemas de cultivo celular tridimensionais (3d) baseados em arcabouços poliméricos, têm sido empregados com a finalidade de controlar os processos de multiplicação e diferenciação dessas células in vitro. assim, o presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e avaliação de um sistema de cultivo 3d de células-tronco mesenquimais da placenta humana (ctms-ph) como possível modelo de nicho hematopoiético in vitro para o estudo da fisiologia da hematopoiese, e em particular para a expansão ex vivo das ctphs para transplante. para isso, as células foram isoladas, da região das vilosidades coriônicas da placenta humana (n=3) onde se encontram os nichos hematopoiéticos nesse órgão durante o desenvolvimento embrionário, pela capacidade da adesão ao plástico de cultivo. as células foram, então, caracterizadas morfologicamente e funcionalmente como sendo fibroblastóide, com potencial de diferenciação nas linhagens mesodermais adipogênica e osteogênica e com capacidade de formar colônia (cfc) quando semeadas em baixa densidade obtendo em média 5 ± 4,546, 15,83 ± 3,488, 3,75 ± 2,872 colônias nas amostras 1, 2 e 3, respectivamente. todavia, foram realizados ensaios de curvas de proliferação para avaliar o comportamento da multiplicação das células em cultivo em função do tempo, observando um padrão de duas fases na cinética de multiplicação. por outro lado, as ctms-ph foram capazes de ser transfectadas com o plasmídeo pcx-egfp, que contém um inserto do gene da proteína verde fluorescente (gfp), através da metodologia de eletroporação, utilizando o sistema comercial neon® transfection system. para tal, 5 x 104 células foram submetidas a tratamentos com dois protocolos denominados a (1 pulso de 20 ms de 1700 v) e, b (1 pulso de 40 ms de 990 v) utilizando concentrações de 1 ou 2 ¿g de dna plasmídico, e comparados através da quantificação da fluorescência, sendo a configuração do protocolo b com 1 ¿g de dna a condição de maior eficiência relativa de transfecção. ainda, foi possível padronizar a confecção de arcabouços de poli(metacrilato de metila) (pmma) com valores calculados do tamanho de poros de 875,1 ± 231,9 ¿m, 1424 ± 310,3 ¿m e 1832 ± 260,1 ¿m, porosidade média de 75,14%, 73,49% e 71,71%, respectivamente, e módulo de young controlável mediante a utilização de um sistema de fusão de cristais de nacl em ambiente úmido. finalmente, foi possível cultivar as ctms-ph nos arcabouços de pmma com os três tamanhos de poros. através das técnicas de microscopia eletrônica de varredura (mev) e microscopia confocal foi observado que as ctms-ph apresentaram uma distribuição 3d no interior dos arcabouços, com boa capacidade de adesão e possivelmente com depósitos de moléculas de matriz extracelular. com base nos resultados, conclui-se que este sistema de cultivo 3d de ctms-ph em arcabouços de pmma representa um modelo atrativo para futuras avaliações de expansão ex vivo de ctphs.

Pós-processamento: Índice de Shannon: 3.94843

ODS 1 ODS 2 ODS 3 ODS 4 ODS 5 ODS 6 ODS 7 ODS 8 ODS 9 ODS 10 ODS 11 ODS 12 ODS 13 ODS 14 ODS 15 ODS 16
5,07% 5,95% 6,70% 6,00% 6,56% 4,32% 6,29% 5,39% 10,05% 4,53% 8,46% 5,80% 4,57% 6,42% 4,22% 9,67%
ODS Predominates
ODS 9
ODS 1

5,07%

ODS 2

5,95%

ODS 3

6,70%

ODS 4

6,00%

ODS 5

6,56%

ODS 6

4,32%

ODS 7

6,29%

ODS 8

5,39%

ODS 9

10,05%

ODS 10

4,53%

ODS 11

8,46%

ODS 12

5,80%

ODS 13

4,57%

ODS 14

6,42%

ODS 15

4,22%

ODS 16

9,67%