
Universidade Federal de Santa catarina (UFSC)
Programa de Pós-graduação em Engenharia, Gestão e Mídia do Conhecimento (PPGEGC)
Detalhes do Documento Analisado
Centro: Ciências Biológicas
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento
Dimensão Institucional: Pós-Graduação
Dimensão ODS: Econômica
Tipo do Documento: Dissertação
Título: ENGENHARIA DE NICHO HEMATOPOIÉTICO: AVALIAÇÃO DE UM SISTEMA DE CULTURA TRIDIMENSIONAL DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DA PLACENTA HUMANA EM ARCABOUÇOS DE POLI(METACRILATO DE METILA) (PMMA)
Orientador
- MARCIO ALVAREZ DA SILVA
Aluno
- RODRIGO PEREZ LUCAS
Conteúdo
No contexto da engenharia de tecidos, as novas propostas têm em vista a recriação dos microambientes biológicos (nichos) onde residem as células-tronco (cts) in vivo, em particular os nichos hematopoiéticos onde as células-tronco progenitoras hematopoiéticas (ctphs) são naturalmente expandidas. sistemas de cultivo celular tridimensionais (3d) baseados em arcabouços poliméricos, têm sido empregados com a finalidade de controlar os processos de multiplicação e diferenciação dessas células in vitro. assim, o presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e avaliação de um sistema de cultivo 3d de células-tronco mesenquimais da placenta humana (ctms-ph) como possível modelo de nicho hematopoiético in vitro para o estudo da fisiologia da hematopoiese, e em particular para a expansão ex vivo das ctphs para transplante. para isso, as células foram isoladas, da região das vilosidades coriônicas da placenta humana (n=3) onde se encontram os nichos hematopoiéticos nesse órgão durante o desenvolvimento embrionário, pela capacidade da adesão ao plástico de cultivo. as células foram, então, caracterizadas morfologicamente e funcionalmente como sendo fibroblastóide, com potencial de diferenciação nas linhagens mesodermais adipogênica e osteogênica e com capacidade de formar colônia (cfc) quando semeadas em baixa densidade obtendo em média 5 ± 4,546, 15,83 ± 3,488, 3,75 ± 2,872 colônias nas amostras 1, 2 e 3, respectivamente. todavia, foram realizados ensaios de curvas de proliferação para avaliar o comportamento da multiplicação das células em cultivo em função do tempo, observando um padrão de duas fases na cinética de multiplicação. por outro lado, as ctms-ph foram capazes de ser transfectadas com o plasmídeo pcx-egfp, que contém um inserto do gene da proteína verde fluorescente (gfp), através da metodologia de eletroporação, utilizando o sistema comercial neon® transfection system. para tal, 5 x 104 células foram submetidas a tratamentos com dois protocolos denominados a (1 pulso de 20 ms de 1700 v) e, b (1 pulso de 40 ms de 990 v) utilizando concentrações de 1 ou 2 ¿g de dna plasmídico, e comparados através da quantificação da fluorescência, sendo a configuração do protocolo b com 1 ¿g de dna a condição de maior eficiência relativa de transfecção. ainda, foi possível padronizar a confecção de arcabouços de poli(metacrilato de metila) (pmma) com valores calculados do tamanho de poros de 875,1 ± 231,9 ¿m, 1424 ± 310,3 ¿m e 1832 ± 260,1 ¿m, porosidade média de 75,14%, 73,49% e 71,71%, respectivamente, e módulo de young controlável mediante a utilização de um sistema de fusão de cristais de nacl em ambiente úmido. finalmente, foi possível cultivar as ctms-ph nos arcabouços de pmma com os três tamanhos de poros. através das técnicas de microscopia eletrônica de varredura (mev) e microscopia confocal foi observado que as ctms-ph apresentaram uma distribuição 3d no interior dos arcabouços, com boa capacidade de adesão e possivelmente com depósitos de moléculas de matriz extracelular. com base nos resultados, conclui-se que este sistema de cultivo 3d de ctms-ph em arcabouços de pmma representa um modelo atrativo para futuras avaliações de expansão ex vivo de ctphs.
Pós-processamento: Índice de Shannon: 3.94843
ODS 1 | ODS 2 | ODS 3 | ODS 4 | ODS 5 | ODS 6 | ODS 7 | ODS 8 | ODS 9 | ODS 10 | ODS 11 | ODS 12 | ODS 13 | ODS 14 | ODS 15 | ODS 16 |
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5,07% | 5,95% | 6,70% | 6,00% | 6,56% | 4,32% | 6,29% | 5,39% | 10,05% | 4,53% | 8,46% | 5,80% | 4,57% | 6,42% | 4,22% | 9,67% |
ODS Predominates


5,07%

5,95%

6,70%

6,00%

6,56%

4,32%

6,29%

5,39%

10,05%

4,53%

8,46%

5,80%

4,57%

6,42%

4,22%

9,67%