A ceratite amebiana é uma inflamação da córnea, considerada grave e de difícil tratamento, causada por acanthamoeba spp. as membranas dos trofozoítos e parede dos cistos de acanthamoeba spp., apresentam componentes essênciais como o ergosterol e celulose. sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi preparar e avaliar nanocarreadores de sirnas para o silenciamento das enzimas 14 ¿-demetilase (14alpha) e glicogênio fosforilase (glico) e seus efeitos sinérgicos em acanthamoeba castellanii. como carreadores utilizou-se nanopartículas híbridas (np) e nanoemulsão lipídica (ne), preparadas e caracterizadas quanto ao tamanho, índice de polidispersão (pdi) e potencial zeta. para avaliação dos efeitos das formulações em acanthamoeba spp., trofozoítos foram incubados em meio pyg e em meio de indução de encistamento (nem) com os nanocarreadores com sirnas (np_glico, np_14alpha, ne_glico, ne_14alpha) e na ausência de sirnas (nk) por contagem em hemocitometro e pelo ensaio de alamarblue®. a citotoxicidade das ne foi avaliada pelo ensaio do mtt em células de córnea de coelho (sirc). o silenciamento gênico foi avaliado por reação em cadeia da polimerase em tempo real após incubação dos trofozoítos em meio nem por 15 h com as formulações de ne. a microscopia confocal confirmou a capacidade dos sistemas em promover o escape endossomal e entregar os sirnas. as ne se manteram adequadas para utilização ocular durante os 21 dias analisados, e as np perderam sua estabilidade com aumento considerável de tamanho e pdi após 7 dias. ambos os carreadores apresentaram potencial zeta negativo. no tratamento dos trofozoítos com a formulação np_14alpha não houve diminuição da viabilidade, já np_glico ocorreu a queda de 17% em 96 h. após incubação no meio nem, np_14alpha e np_glico foram capazes de diminuir 10% dos cistos formados. na concentração de 1 ¿m com a np, observou-se diminuição da formação de cistos maduros em maior porcentagem, porém devido aos precipitados de cálcio visualizados optou-se em parar as análises com este carreador. quando as nanoemulsões foram incubadas com os trofozoítos, observou-se diminuição das formas de 32% para nk_glico e ne_glico, além de 57% e 33% na presença de nk_14alpha e ne_14alpha, respectivamente. quando tratados com ambos sirnas (g14), para nk_g14 e ne_g14 apresentaram diminuição da viabilidade dos trofozoítos de 45% e 51%, respectivamente. após incubação em meio nem, com nk_glico e ne_glico houve queda de 30% e 13% na formação dos cistos, e ne_g14 foi capaz de diminuir 18%. a citotoxicidade em células sirc manteve-se superior a 90%. observou-se a redução da expressão dos genes glicogênio fosforilase e 14 ¿-demetilase de 20% (ne_glico) e 21% (ne_14alpha) em relação aos controles. a partir dos resultados podese concluir que ambos os nanocarrreadores foram eficientes na entrega de sirna em a. castellanii. o carreador ne contendo sirnas para os genes alvos utilizados é promissor para a aplicação na terapia gênica ocular associada a fármacos no tratamento da ceratite amebiana.