O estímulo à utilização de biocombustíveis como biodiesel, fomentado pelos riscos ambientais associados ao uso de combustíveis fósseis, faz com que aumente a incidência de contaminações com este biocombustível e torna necessário o desenvolvimento de tecnologias de remediação específicas. para tanto, um experimento de campo foi conduzido para avaliar o potencial da bioestimulação anaeróbia na aceleração da degradação dos compostos presentes na mistura b20 (20% biodiesel de soja e 80% diesel v/v). foram liberados 100l de b20 diretamente sobre lençol freático em uma área de 1m2 rebaixada até 1,7m de profundidade. um mês após a liberação, injeções semanais de acetato de amônio foram conduzidas na área experimental, com duração de 1,25 anos, para promover a estimulação da biomassa total e microorganismos específicos. condições anaeróbias foram estabelecidas pela presença do b20 e do acetato de amônio, tendo sido a metanogênese o processo predominante e de maior contribuição para a degradação dos compostos do b20, especialmente dos aromáticos. limitações termodinâmicas foram impostas pelo acúmulo de metabólitos de degradação (acetato e hidrogênio) produzidos, em um primeiro momento, pela degradação preferencial dos ésteres de biodiesel, resultando no retardo da degradação dos btex e hpas. porém, microorganismos específicos foram estimulados pela introdução de acetato de amônio, incluindo gêneros associados a processos sintróficos e à degradação anaeróbia de compostos aromáticos, tendo sido capazes de consumir os metabólitos que se acumularam no sistema, superando as limitações termodinâmicas e culminando na rápida degradação dos btex e hpas (em 0,7 e 1,0 ano, respectivamente), quando comparada a processos de atenuação natural. portanto, a bioestimulação metanogênica demonstrou acelerar a degradação dos compostos presentes no b20, podendo ser considerada para remediação de aquíferos contaminados com este biocombustível, especialmente em regiões próximas à fonte de contaminação que possuem maior propensão à anaerobiose e inviabilizam a aplicação de técnicas aeróbias de remediação.