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Universidade Federal de Santa catarina (UFSC)
Programa de Pós-graduação em Engenharia, Gestão e Mídia do Conhecimento (PPGEGC)
Detalhes do Documento Analisado

Centro: Não Informado

Departamento: Não Informado

Dimensão Institucional: Pós-Graduação

Dimensão ODS: Social

Tipo do Documento: Dissertação

Título: DESENVOLVIMENTO E APLICAÇÃO DE UM SISTEMA CELULAR REPÓRTER PARA HERPES SIMPLEX VÍRUS E PADRONIZAÇÃO DE UMA PCR QUANTITATIVA PARA POLIOMAVÍRUS BK

Orientador
  • THAIS CRISTINE MARQUES SINCERO
Aluno
  • CLARISSA FELTRIN

Conteúdo

Pacientes imunodeprimidos podem apresentar infecções virais com evolução rápida, sintomatologias atípicas graves e muitas vezes fatais, sendo fundamental um diagnóstico precoce para estabelecimento do tratamento efetivo, redução da toxicidade e da resistência aos antivirais. hsv-1, hsv-2 e poliomavírus bk são vírus de importância clínica para imunodeprimidos e podem levar a rejeição de órgãos em transplantados. assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um sistema celular repórter, utilizando a proteína fluorescente gfp, para hsv-1 e 2 e implantar uma qpcr utilizando amostras clínicas de pacientes transplantados renais para detecção de poliomavírus bk. o sistema celular repórter foi construído através da transfecção de células vero com o vetor pzsgreen1-1 ligado ao promotor icp10 (f3r3 e f4r3) da rr1 do hsv-2. a regulação da expressão da gfp via icp10 é dependente da infecção viral e acontece por meio da proteína viral transativadora vp16 e de fatores celulares oct-1 e hcf-1. a efetividade do sistema foi avaliada por infecção viral e pela aplicação de antivirais (aciclovir, ácido gálico, convalotoxina e extrato de uncaria sp.) e candidatos antivirais inativos (extrato de passiflora edulis e derivados de cardenolídeos). o sistema repórter f4r3 zsgreen1-1 expressou gfp em função da infecção por hsv-1 e 2, a qual foi detectada por microscopia de fluorescência e/ou citometria de fluxo. em análise por citometria de fluxo, a fluorescência do sistema repórter correlacionou-se diretamente com os títulos virais (moi de 4,0 x10-3 a 3,3 x10-4, ou seja, 1 partícula viral a cada 250 a 3000 células), o sistema manteve a capacidade de expressão da gfp na presença de agentes sem propriedade antiviral e não expressou fluorescência quando tratado com antivirais. o sistema f4r3 zsgreen1-1 mostrou-se um sistema funcional com possíveis aplicações para diagnóstico clínico, para elaboração de testes de resistência aos antivirais e para a pesquisa de novos medicamentos. a qpcr para poliomavírus bk foi implantada utilizando amostras de dna cedidas pelo hemosc com iniciadores dirigidos para o antígeno t viral. o limite de detecção foi de 18 cópias genômicas/ reação com quantificações variando entre 9,8 x 105 a 6,7 x 107 cópias genômicas/ ml. a qpcr foi efetiva para análises de amostras clínicas e apresentou limite de detecção suficiente para avaliação de risco de nefropatia em transplantados renais.

Índice de Shannon: 3.93962

Índice de Gini: 0.93156

ODS 1 ODS 2 ODS 3 ODS 4 ODS 5 ODS 6 ODS 7 ODS 8 ODS 9 ODS 10 ODS 11 ODS 12 ODS 13 ODS 14 ODS 15 ODS 16
4,24% 5,98% 12,48% 6,77% 4,97% 5,45% 7,09% 6,17% 7,87% 4,23% 6,67% 4,94% 5,95% 6,50% 4,15% 6,55%
ODS Predominates
ODS 3
ODS 1

4,24%

ODS 2

5,98%

ODS 3

12,48%

ODS 4

6,77%

ODS 5

4,97%

ODS 6

5,45%

ODS 7

7,09%

ODS 8

6,17%

ODS 9

7,87%

ODS 10

4,23%

ODS 11

6,67%

ODS 12

4,94%

ODS 13

5,95%

ODS 14

6,50%

ODS 15

4,15%

ODS 16

6,55%